Омоложение с применением технологии Elight (клиническое исследование)Цели: Технология электрооптической синергии является одним из недавно описанных методов неабляционного омоложения кожи. Целью данного исследования является оценка влияния электрооптической синергии на состав соединительной ткани с помощью гистологических и иммуногистохимических методов в сочетании с компьютерным морфометрическим анализом.
Дизайн: проспективное клиническое исследование.
Участники: Шесть добровольцев с типами кожи по Фитцпатрику от 3 до 4 и морщинами по Глогау с I по II классы прошли три месяца (6 сеансов с двухнедельными интервалами) электрооптического синергетического лечения.
Размеры: Стандартные фотографии и биопсии кожи были получены в начале лечения, а также через три и шесть месяцев после начала лечения. Авторы провели количественную оценку общего эластина, тропоэластина, коллагена типов I, III и VII и вновь синтезированного коллагена.
Результаты. После электрооптического синергетического лечения наблюдалось заметное клиническое и гистологическое улучшение. Выявлено статистически значимое увеличение средних значений коллагена типов I, III и VII, а также вновь синтезированного коллагена вместе с повышением уровня тропоэластина, при этом средний уровень общего эластина значительно снизился в конце лечения и через три месяца после лечения.
Вывод: Электрооптическая синергия — эффективное средство для коррекции дряблости кожи лица. Этот метод стимулирует процессы восстановления и обращает вспять клинические, а также гистопатологические признаки старения с преимуществом относительно безрисковой процедуры с минимальным временем восстановления пациента.
Фотостарение было впервые описано в 1986 году как следствие хронического воздействия элементов, в первую очередь ультрафиолетового (УФ) излучения на кожу.
1 ,
2 Клинически фотостарение кожи характеризуется морщинами, шероховатостью, дряблостью, повышенной ломкостью, пигментными изменениями, телеангиэктазиями и замедленным заживлением ран.
3 Гистологическим и ультраструктурным признаком фотоповрежденной кожи является накопление эластического материала в сосочковом слое и среднем слое дермы, процесс, известный как солнечный эластоз.
4 Это сопровождается количественными изменениями биосинтеза коллагена, что выражается в неуклонном снижении содержания коллагена примерно на 1% в год.
4 ,
5Архитектура коллагеновых волокон становится дезорганизованной, с усиленным разрушением и уменьшением образования сети.
6 Эти изменения способствуют провисанию и образованию морщин на коже.
7 Предыдущие данные показали повышенный интерес к неабляционным методам лечения старения кожи, которые используются для «безопасного и эффективного» омоложения кожи с небольшим временем восстановления или без него и с меньшим количеством осложнений, чем при абляционных процедурах.
7 Интенсивный импульсный свет (IPL) и радиочастота (RF) являются двумя примерами эффективного неабляционного лечения старения кожи. Недавно сочетание обеих энергий в одном профиле импульса для создания электрооптической синергии (ELOS) использовалось для улучшения текстурных изменений и омоложения фотостареющей кожи.
8Механизм этой новой технологии основан на следующих двух комбинированных подходах: а) технология IPL на основе света, фототермический механизм, при котором импульсная оптическая энергия нацелена и предварительно нагревает отдельные хромофоры, создавая разницу в температуре между мишенью и окружающей тканью.
9 и б) RF, создание волн напряжения на поверхности кожи, производящих однородное тепло на контролируемой глубине в слоях дермы. Таким образом, обе энергии создают термическую рану в целевой области с последующим ремоделированием и переориентацией коллагеновых волокон и образованием нового коллагена, что достигается после нескольких месяцев лечения.
10 ,
11Цель настоящего исследования заключалась в объективной количественной оценке гистологических изменений в коже и оценке соответствующего клинического результата после использования подхода ELOS в качестве неабляционного метода омоложения кожи.
Материалы и методы
Протокол лечения. Настоящее исследование было проведено на шести добровольцах, четырех мужчинах и двух женщинах, с типом кожи по Фитцпатрику от 3 до 4 и морщинами от I до II класса по Глогау,
12которые посещали амбулаторную дерматологическую клинику университетской больницы Аль-Минья, Аль-Минья, Египет. Их возраст колебался от 41 до 69 лет, в среднем 57±11,8. Детали лечения и исследования были полностью разъяснены субъектам и всем подписанным формам информированного согласия. Клиницисты отметили периорбитальную область с обеих сторон (область обработки) и нанесли крем для местного обезболивания (лидокаин 2,5% + прилокаин 2,5%) в виде толстого покрытия, которое оставили под окклюзией на 90 минут. Затем крем осторожно удаляли, и субъект помещался для лечения. На место лечения наносили токопроводящий охлаждающий гель, чтобы обеспечить равномерную передачу энергии и улучшить тепловой и электрический контакт между рукояткой и кожей.
На протяжении всего лечебного сеанса использовалась система непрерывного внешнего воздушного охлаждения. Авторы использовали устройство E-light (Beijing ADSS Development Co, Пекин, Китай), которое производит комбинацию энергии IPL и RF в одном и том же профиле импульса со следующими характеристиками: наконечник с размером пятна 12x30 мм, отсекающий фильтр 640 нм, 25 Дж/см
2энергия, длительность импульса 30 мс и ВЧ-мощность 30 Вт. Каждый доброволец получил по 12 импульсов на каждую сторону (всего 24 импульса); о невыносимом жаре во время этих сеансов не сообщалось. Добровольцы прошли в общей сложности три месяца лечения (6 сеансов с двухнедельными интервалами). Они были проинструктированы избегать пребывания на солнце и использовать предписанный солнцезащитный крем. Кроме того, избегали использования пакетов со льдом после каждого сеанса, чтобы способствовать заживлению. Фотографии были сделаны до и в конце лечения, а также через три месяца после лечения. В эти моменты времени были получены пункционные биопсии (3 мм) кожи лица. Биопсии после лечения брали с участка рядом с долечебным. Ткани фиксировали в 10% забуференном формалине, заливали в парафин и делали срезы толщиной 5 мкм.
Гистология и иммуноокрашивание. Все гистологические анализы и анализы иммуноокрашивания проводились в отделении дерматологии и биологии кожи Университета Томаса Джефферсона, Филадельфия, Пенсильвания. Гистопатологические исследования проводились с использованием стандартного окрашивания гематоксилином и эозином (H&E), Verhoeff van Gieson (HT25A; Sigma Aldrich, Сент-Луис, Миссури) и окрашивания пикросириусом красным (Direct Red 80, Sigma Aldrich). Авторы выполнили окрашивание иммунопероксидазой на общий эластин и коллаген типов I и III. Вкратце, предметные стекла нагревали при 60ºC в течение 30–60 минут, а затем депарафинизировали и антигены извлекали в 0,1 М цитрате натрия (pH 6,0) в течение пяти минут с помощью микроволнового метода. Неспецифические сайты блокировали блокирующим буфером (5% нормальная козья сыворотка, 1% БСА и 0,02% ТХ-100 в PBS) и ткани инкубировали с антителами к эластину (1:300; Е4013; Sigma Aldrich), коллаген типа I (1:400; sc-59772; Santa Cruz Biotech, Калифорния) и коллаген типа III (1:600; ab6310; Abcam, Кембридж, Массачусетс). Затем образцы инкубировали с биотинилированным вторичным антителом (1:200; PK-6102; Vector Labs, Калифорния), реагентом ABC (Vectatain Elite ABC Peroxidase Kits Mouse; PK-6102; Vector Labs) и окрашивали с помощью набора DAB Chromogen Substrate Kit (K3468). ; Дако, Калифорния). Все слайды были контрастно окрашены гематоксилином (7211; Thermo Scientific, Айова) и смонтированы для просмотра. и окрашивали набором субстратов DAB Chromogen Substrate Kit (K3468; Dako, Калифорния). Все слайды были контрастно окрашены гематоксилином (7211; Thermo Scientific, Айова) и смонтированы для просмотра. и окрашивали набором субстратов DAB Chromogen Substrate Kit (K3468; Dako, Калифорния). Все слайды были контрастно окрашены гематоксилином (7211; Thermo Scientific, Айова) и смонтированы для просмотра. Для коллагена VII типа и тропоэластина использовали непрямую иммунофлуоресценцию (IF). После депарафинизации и извлечения антигена, как описано выше, предметные стекла инкубировали с антителами к коллагену VII типа (1:600; sc-33710; Santa Cruz Biotech), вторичными антителами Alexa Fluor козы против мышиного иммуноглобулина (IgG) 594 (1:400). ; Molecular Probes, Eugene, OR) и дигидрохлорид 4',6-диамидино-2-фенилиндола (DAPI) (1:1000; D8417; Sigma Aldrich) для окрашивания ядер, а затем слайды помещали для просмотра. Для тропоэластина авторы использовали систему микрозондов (Fisher Scientific #FD-188-10A) с реагентами от Open Biosystems (Хантсвилл, Алабама), как описано ранее.
13Ткани инкубировали с блокирующим буфером (5% нормальной козьей сыворотки, 1% BSA и 0,01% Triton-X-100 в PBS), тропоэластиновым антителом GA317 (1:400; Elastin Products, Owensville, Миссури) и козьим антигеном Alexa Fluor. вторичное антитело кролика IgG 594 (1:400; Molecular Probes). Все гистометрические оценки проводились с использованием компьютерного программного обеспечения (Image-Pro Plus; Media Cybernetics, Silver Spring, Maryland).
Статистический анализ. Количественные оценки гистологических измерений анализировали с использованием пакета программного обеспечения для статистических исследований (SPSS) (SPSS для Windows; версия 16, SPSS Inc.; Чикаго, Иллинойс). Статистический анализ был выполнен с использованием однофакторного дисперсионного анализа, сопоставленных пар Уилкоксона и критерия хи-квадрат. Данные выражали как среднее значение ± стандартное отклонение (SD). Статистическую значимость определяли как
p ≤ 0,05.
Полученные результаты Клиническая оценка. Все участники завершили исследование ELOS и показали как субъективное, так и объективное улучшение клинического проявления морщин в периорбитальной области (Рисунок 1А). В каждой конечной точке (до, в конце и через три месяца после лечения) добровольцев, двух дерматологов и двух независимых наблюдателей просили оценить следующие критерии: уменьшение морщин, подтяжка и текстура кожи и общее удовлетворение. Их оценка оценивалась по пятибалльной шкале (нет = 0%, легкая = 1–25%, средняя = 26–50%, хорошая = 51–75% и очень хорошая = 76–100%). . Результаты были сведены в таблицу и сопоставлены с исходным уровнем на статистическую значимость с помощью критерия хи-квадрат Пирсона (таблица 1 и Рисунок 1Б). Оценки дерматологов и независимых наблюдателей были сопоставимы с оценками добровольцев. Кроме того, потенциальные побочные эффекты, включая эритему, отек и гипо- или гиперпигментацию, оценивали по четырехбалльной шкале (отсутствие, легкие, умеренные и тяжелые); ни у одного из испытуемых не было никаких осложнений.